Proteínas são biomoléculas responsáveis por diversas funções nas células, sendo essenciais na manutenção da homeostase celular. A TRAP-1 é uma chaperona molecular mitocondrial, responsável pela manutenção da homeostase mitocondrial [1,2,3]. A CyP-D é uma das ciclofilinas presentes em humanos, e possui um papel de co-chaperona, regulando diversos mecanismos de atividade de chaperonas além de outras proteínas [4]. Ambas, TRAP-1 e CyP-D são alvos de grande interesse [1,2,5,6,7,8], pois estão relacionadas com o fenômeno da permeabilidade transitória mitocondrial, presente em alguns cenários patológicos, e podem ser envolvidos em possíveis abordagens de combate a doenças, como o câncer. O principal objetivo desse trabalho é avaliar a interação entre as duas proteínas recombinantes humanas. Para tal, fez-se uso de técnicas de expressão heteróloga e purificação para a obtenção das proteínas, seguida pela análise por gel filtração analítica e por pulldown para avaliação da interação proteína-proteína.

A expressão heteróloga das proteínas foi realizada em E. coli, seguida pela extração por um processo de lise mecânico-enzimática e posterior purificação por cromatografia líquida. Primeiramente foi realizada uma cromatografia de afinidade por metal imobilizado [9] seguida por uma cromatografia de exclusão molecular [10]. A eficiência dos processos foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (SDS-PAGE) e a determinação da concentração das proteínas puras foi realizada por medidas espectrofotométricas. Ambas as proteínas foram caracterizadas por meio do processo de gel filtração analítica e finalmente, a interação foi avaliada por pulldown [11].

A análise dos processos de obtenção das proteínas demonstra que ambas foram produzidas com sucesso. A gel filtração analítica indicou que a proteína TRAP-1 é um dímero assimétrico em solução e Cyp-D um monômero globular, dados corroborados pela literatura. O pulldown confirmou a interação física entre as proteínas em todas as condições testadas. Alguns objetivos não foram iniciados devido a suspensão das atividades diante do cenário da pandemia, mas estão listados como perspectivas futuras de continuidade desse projeto, onde se encaixam a análise da interação por gel filtração analítica, assim como as caracterizações estruturais das proteínas, individualmente e complexadas, por dicroísmo circular, fluorescência e calorimetria de titulação isotérmica. A confirmação dessa interação e futuro detalhamento de seus parâmetros moleculares  e termodinâmicos irá contribuir para o entendimento do correto funcionamento maquinaria celular. Tais informações permitirão a compreensão da atuação dessas proteínas tanto no funcionamento organelar normal, como em cenários patológicos o que,  por sua vez, abre caminho para a proposição de diferentes abordagens que visem solucionar esses desafios enfrentados pelas ciências médicas.